Biologie / Zellkultur
Hämocytometer-Rechner (Zellen pro ml und Viabilität)
Wandle Zählkammerwerte in Zellen pro Milliliter um: Gib die lebenden und toten Zellen in jedem großen Quadrat sowie die Verdünnung ein und erhalte die lebende und gesamte Konzentration, die Viabilität und die Zellzahl in deiner Suspension.
Hämocytometer-Rechner (Zellen pro ml und Viabilität): In einer verbesserten Neubauer-Zählkammer enthält jedes große Quadrat 0,1 µL. Daher gilt: Zellen pro ml = durchschnittliche Zellzahl pro Quadrat × Verdünnung × 10⁴. Zählungen von 52, 47, 55 und 49 lebenden Zellen bei einer 2×-Verdünnung mit Trypanblau ergeben 50,75 × 2 × 10⁴ = 1,015 × 10⁶ lebende Zellen pro ml. Bei 18 toten Zellen darunter beträgt die Viabilität 203 ÷ 221 = 91,9%. Läuft zu 100% lokal in deinem Browser, ohne Datei-Uploads zum Server.
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In einer verbesserten Neubauer-Zählkammer fasst jedes große Eckquadrat 0.1 µL (1 mm × 1 mm × 0.1 mm). Daher gilt: Zellen pro mL = durchschnittliche Anzahl pro Quadrat × Verdünnungsfaktor × 10,000. Zähle die vier Eckquadrate und berücksichtige dabei Zellen auf zwei der Kanten, nicht aber auf den beiden anderen. Strebe 20–200 Zellen pro Quadrat an und verdünne stärker, wenn es mehr sind. Trypanblau dringt in tote Zellen ein und färbt sie blau; beim Mischen gleicher Volumina verdoppelt sich die Verdünnung.
Aussäen einer Platte
Um 2 × 10⁵ Zellen pro Vertiefung aus einer Suspension mit 1,015 × 10⁶ lebenden Zellen pro mL auszusäen, gib 0,197 mL, also etwa 197 µL, in jede Vertiefung.
Um die Suspension auf eine gewünschte Zelldichte zu verdünnen, nutze den Verdünnungsrechner.
Genauigkeit verbessern
Mische die Suspension vor der Probenentnahme gründlich, befülle die Kammer in einem gleichmäßigen Zug und zähle beide Kammern: Der Zählfehler sinkt mit der Quadratwurzel der Anzahl gezählter Zellen, daher ergeben 400 Zellen etwa ±5 %.
Der Mittelwert-Rechner zeigt außerdem die Streuung zwischen den Quadraten an, wodurch eine ungleichmäßige Befüllung erkannt werden kann.
So benutzt du es
- Zähle die lebenden und toten (gefärbten) Zellen in jedem großen Eckquadrat getrennt.
- Gib die Zellzahlen und den Verdünnungsfaktor ein: 2 bei einer Mischung zu gleichen Teilen mit Trypanblau.
- Lies die Anzahl der lebenden Zellen pro ml, die Viabilität und die Gesamtzahl ab.
Datenschutz & Einschränkungen
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Häufige Fragen
Welche Quadrate sollte ich zählen?
Die vier großen Eckquadrate (oder bei kleinen Zellen die 25 kleinen Quadrate des mittleren Quadrats; gib in diesem Fall die Gesamtzahl als ein Quadrat ein und passe sie an). Zähle Zellen, die die obere und linke Linie berühren, aber nicht die untere und rechte.
Wie viele Zellen sollte ein Quadrat enthalten?
Für eine genaue Zählung etwa 20–200. Verdünne stärker, wenn es mehr sind, oder zähle mehr Quadrate, wenn es weniger sind.
Welche Viabilität ist akzeptabel?
Das hängt von den Zellen und dem Experiment ab. Für gesunde Kulturen sind über 90% üblich; unter 80% deutet auf ein Problem hin.
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